Количественная тонкослойная хроматография
Тонкослойная хроматография находит все большее применение для количественного определения углеводов. Этот метод чрезвычайно полезен при изучении кинетики реакций, исследовании их механизма и определении выхода продуктов, однако он применим лишь для анализа смесей, компоненты которых можно полностью разделить. Способы количественного определения делят на две большие группы:
а) прямое определение (установление количества вещества непосредственно на пластинке);
б) косвенное определение (элюирование пятен вещества с последующим анализом элюата физическими методами).
Для прямого определения используются денситометрия и радиометрия элюатов. Обе группы методов требуют построения калибровочных кривых, связывающих концентрацию компонента с интенсивностью окраски, степенью поглощения или уровнем радиоактивности соединения.
Если на каждом этапе анализа соблюдаются все меры предосторожности, точность описанных ниже методов составляет 3—5%. Измерение интенсивности окраски сахара или продуктов его распада непосредственно на хроматограмме производится методом денситометрии. Ввиду того, что сами сахара не окрашены, их обрабатывают реактивом, вызывающим появление окрашенного пятна на фоне слоя сорбента. Цвет последнего, как правило, не изменяется (белый). Если сорбент все-таки окрашивается, необходимо, чтобы окрашивание было. Пятна должны иметь четко очерченные границы и не должны выцветать. Даллас, а также Шеллард и Алам подробно рассмотрели факторы, влияющие на точность и воспроизводимость результатов анализа
Чтобы оценить содержание сахаров в образце, можно также сфотографировать хроматограмму (или сделать фотокопию) и, разрезав поученный снимок на полосы, просканировать их на денситометре.
Сахара, несущие радиоактивную метку, количественно определяют непосредственно на хроматограмме с помощью счетчика радиоактивности или радиоавтографическим методом путем денситометрического сканирования рентгеновского снимка хроматограммы.
После вымывания сахара проводят либо прямую оценку его количества, либо предварительно обрабатывают его подходящим реактивом, а затем измеряют поглощение в УФ- или видимом свете. Трудности возникают в тех случаях, когда с сорбента элюируются посторонние вещества, мешающие измерению поглощения. Чтобы исключить возможные ошибки, необходимо тем же способом иследовать элюат образца сорбента, взятого на уровне пятна.
Сахара, несущие радиоактивную метку, количественно определяют в элюате при помощи жидкостного сцинтилляционного счетчика. Высокая точность оценки достигается даже в тех случая, когда сорбент (~0,1 г) попадает в ампулу счетчика (15 мл).
Смотрите также
Ядерная энергетика
Атомная энергетика - область техники,
основанная на использовании реакции деления атомных ядер для выработки теплоты
и производства электроэнергии. В 1990 атомными электростанциями (АЭС) ми ...
Химическая термодинамика
Химическая термодинамика – наука, изучающая условия
устойчивости систем и законы.
Термодинамика – наука о макросистемах.
Она позволяет apriori определить принципиальную
невозможность того или и ...
Целлюлоза
...