Препаративная тонкослойная хроматография

Препаративное разделение 0,05—1 г веществ методом ТСХ становится возможным при применении толстого слоя сорбента (0,5—5 мм). Этот метод используется для выделения индивидуальных сахаров в количествах, достаточных для исследования их свойств. По сравнению с колоночной хроматографией препаративная ТСХ обладает рядом преимуществ: устроится продавцомработа в Спортмасетре отзывы читайте на fashiontime.ru

а) большой скоростью разделения;

б) малым количеством проявителя;

в) легкостью подбора подходящего проявителя путем пробных делений на маленьких пластинках;

г) четкостью зон и простотой их обнаружения;

д) легкостью элюирования соединений.

В препаративной ТСХ применяются те же сорбенты, что и в качественной ТСХ. Для выделения углеводов чаще всего используют силикагель, целлюлозу, кизельгур и окись алюминия. Как правило, оптимальная толщина слоя составляет 1—2 мм. Было показано, что прибавление к сорбенту различных сложных эфиров целлюлозы низкой степени замещения, а также добавление метанола к суспензии сорбента перед нанесением его на пластинку позволяют избежать появления трещин. Однако если сорбент содержит флуоресцентный индикатор, добавление метанола приводит к неравномерному окрашиванию фона. В тех случаях, когда в сорбенте присутствуют примеси, мешающие вымыванию веществ, перед изготовлением суспензии необходимо промыть сорбент хлороформом.

Образец можно нанести на пластинку несколькими способами. Чаще всего разделяемую смесь наносят в виде концентрированного раствора при помощи микропипеток и капилляров с тонким концом или шприцев. Количество смеси зависит от размера пластинки, толщины слоя, типа сорбента (например, для микрокристаллической целлюлозы 0,05 г/мм). Ширина полосы нанесенного образца не должна превышать 0,5 см. Если же она слишком велика, в ряде случаев целесообразно сконцентрировать вещество на расстоянии 1 см от линии старта путем кратковременного проявления пластинки в растворителе, в котором растворимы все компоненты смеси.

Систему растворителей для проявления выбирают на основании предварительных данных по разделению методом качественной ТСХ. Количество повторных проявлений зависит от подвижности компонентов смеси. Если хроматографирование проводится на силикагеле или окиси алюминия, обычно достаточно однократного проявления, в то время как в случае микрокристаллической целлюлозы часто требуется многократное проявление.

ОБНАРУЖЕНИЕ. Для установления положения зон на хроматограмме предложен ряд методов:

а) опрыскивание пластинки реагентами, не разрушающими сахаров, например иодом, родамином В, бромтимоловым синим, 2/,7/-дихлорфлуоресцеином или водой;

б) добавление к сорбенту флуоресцентных индикаторов и обнаружение зон в ультрафиолетовом свете;

в) опрыскивание части слоя, перенесенного с хроматограммы на липкую ленту или пластинку, реагентами, вызывающими деструкцию сахаров;

г) опрыскивание части пластинки деструктивными реагентами, например серной кислотой (предварительно большую часть хроматограммы защищают).

Последний метод применяется редко, так как, во-первых, при этом теряется существенное количество вещества, а во-вторых, как правило, приходится прокаливать пластинку.

После того как положение зон установлено, их соскабливают с пластинки шпателем или собирают «вакуум-очистителем». Можно также элюировать соединение с хроматограммы на фильтровальную бумагу. Далее к сорбенту добавляют растворитель и осадок отделяют фильтрованием или центрифугированием. Для экстракции вещества можно пользоваться аппаратом Сокслета. По возможности следует избегать употребления полярных растворителей, поскольку некоторые сорбенты в них растворяются.

Разделение сахаров методом препаративной ТСХ рассматривается на примере разделения смеси аномерных метил-2,3,6-три-О-бензил-4-О-этил-a,b-D-глюкопиранозидов.

Copyright © 2024 - All Rights Reserved - www.chemicalnow.ru