Методика

Информация для студентов / Хроматографическое разделение углеводов / Методика
Страница 1

ПРЯМОЕ ДЕНСИТОМЕТРИЧЕСКОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ САХАРОВ (на примере использования кукурузной патоки). Анализ проводится на стеклянных пластинках со слоем силикагеля толщиной 0,5 мм. Пластинки используются сразу после получения. Образцы кукурузной патоки с известным содержанием твердого остатка разбавляют водой до концентрации ~1 % (по этому остатку). С помощью шприца на 25 мкл, снабженного дозатором, полученный раствор наносят на пластинку полосами шириной 6 мм, содержащими от 5 до 90 мкг твердого вещества. Чтобы полосы были узкими, их подсушивают током теплого воздуха. (если образец растворяют в каком-либо органическом растворителе, раствор при подсушивании может «ползти» по внешней стороне иглы шприца, что приводит к потере вещества при нанесении). На каждой пластинке помещается 12 полос: 6 — контрольного сиропа и 6 — анализируемого.

Пластинку проявляют в подходящей системе растворителей при ~25°С; фронт растворителя должен подняться на 12 см от стартовой линии. Мальтоолигосахариды вплоть до декасахарида можно разделить в системе этилацетат—метанол—вода (37:40:23 по объему), однако этот проявитель эффективен лишь для пластинок с силикагелем F-254.

Несколько изменив состав проявителя, его можно применять и с другими сорбентами.

Пластинку высушивают в токе теплого воздуха, опрыскивают 50%-ной серной кислотой и прокаливают при 120 °С для обнаружения пятен. Чтобы полученные результаты были воспроизводимыми, пластинка должна быть равномерно опрыскана мелкими капельками распыляемой жидкости.

Количественную оценку состава смеси проводят методом трансмиссионной денситометрии на денситометре, снабженном самописцем и интегратором для определения площади каждого пика.

Пластинку сканируют в горизонтальном направлении так, что сначала регистрируются все моносахариды, затем дисахариды и т. д. Для определения площадей пиков можно также использовать планиметр. Количество каждого компонента определяют по отношению к соответствующему сахару в стандартном образце путем сравнения площадей пиков. В данном случае необходимость в использовании фильтра к лампе денситометра отсутствует.

При использовании в качестве проявителя смеси (3:4:2 по объему) этилацетат — метанол — вода, которая позволяет получить четкое разделение высших сахаров, рассматриваемый метод обеспечивает высокую точность результатов (табл.4).

Таблица 4. Состав кукурузной патоки

определенный методом бумажной и тонкослойной хроматографии

Сахариды, %

моно

ди

три

тетра

пента

гекса

гепта

окта

нона + высшие

Обычная патока (43 экв. глюкозы)

БХ

20,5

15,4

11,3

9,8

7,7

6,0

4,7

3,9

21,5

ТСХ

20,1

14,6

11,

8,6

7,2

5,4

4,9

3,4

23,9

Станд. отклонение для ТСХ

0,7

0,51

0,40

0,30

0,37

0,35

0,11

0,20

0,41

Патока с низким содержанием глюкозы и высоким содержанием мальтозы (43 экв. глюкозы)

БХ

6,8

34,4

17,2

9,4

2,3

2,6

2,4

4,0

20,0

ТСХ

7,3

35,1

17,5

8,5

2,5

2,4

2,0

2,8

21,6

Станд. отклонение для ТСХ

1,25

4,36

3,10

0,66

0,70

1,10

0,77

0,65

1,33

Патока с высоким содержанием глюкозы и мальтозы (70 экв. глюкозы)

БХ

41,1

41,4

3,2

4,8

3,8

1,8

2,4

-

1,6

ТСХ

40,8

42,1

3,5

3,1

2,7

1,5

2,4

-

3,1

Станд. отклонение для ТСХ

1,25

1,62

1,28

0,65

0,26

0,37

0,78

-

0,32

Страницы: 1 2

Смотрите также

Структура и адгезионные свойства отверждённых эпоксидных смол
Введение Целью данной работы- изучить структуру и адгезионные свойства отверждённых эпоксидных смол. Эпоксидные смолы обладают высокой адгезией к различным материалам и поэтому и ...

Винилхлорид - строение, свойства, получение и применение
Винилхлори́д (хло́ристый вини́л, хлорвини́л, хлорэтиле́н, хлорэте́н, этиленхлори́д) — органическое вещество; бесцветный газ со слабым сладковатым запа ...

Кислотные дожди
Термином "кислотные дожди" называют все виды метеорологических осадков - дождь, снег, град, туман, дождь со снегом, - рН которых меньше, чем среднее значение рН дождевой воды (сред ...