Методика

Информация для студентов / Хроматографическое разделение углеводов / Методика
Страница 1

ПРЯМОЕ ДЕНСИТОМЕТРИЧЕСКОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ САХАРОВ (на примере использования кукурузной патоки). Анализ проводится на стеклянных пластинках со слоем силикагеля толщиной 0,5 мм. Пластинки используются сразу после получения. Образцы кукурузной патоки с известным содержанием твердого остатка разбавляют водой до концентрации ~1 % (по этому остатку). С помощью шприца на 25 мкл, снабженного дозатором, полученный раствор наносят на пластинку полосами шириной 6 мм, содержащими от 5 до 90 мкг твердого вещества. Чтобы полосы были узкими, их подсушивают током теплого воздуха. (если образец растворяют в каком-либо органическом растворителе, раствор при подсушивании может «ползти» по внешней стороне иглы шприца, что приводит к потере вещества при нанесении). На каждой пластинке помещается 12 полос: 6 — контрольного сиропа и 6 — анализируемого.

Пластинку проявляют в подходящей системе растворителей при ~25°С; фронт растворителя должен подняться на 12 см от стартовой линии. Мальтоолигосахариды вплоть до декасахарида можно разделить в системе этилацетат—метанол—вода (37:40:23 по объему), однако этот проявитель эффективен лишь для пластинок с силикагелем F-254.

Несколько изменив состав проявителя, его можно применять и с другими сорбентами.

Пластинку высушивают в токе теплого воздуха, опрыскивают 50%-ной серной кислотой и прокаливают при 120 °С для обнаружения пятен. Чтобы полученные результаты были воспроизводимыми, пластинка должна быть равномерно опрыскана мелкими капельками распыляемой жидкости.

Количественную оценку состава смеси проводят методом трансмиссионной денситометрии на денситометре, снабженном самописцем и интегратором для определения площади каждого пика.

Пластинку сканируют в горизонтальном направлении так, что сначала регистрируются все моносахариды, затем дисахариды и т. д. Для определения площадей пиков можно также использовать планиметр. Количество каждого компонента определяют по отношению к соответствующему сахару в стандартном образце путем сравнения площадей пиков. В данном случае необходимость в использовании фильтра к лампе денситометра отсутствует.

При использовании в качестве проявителя смеси (3:4:2 по объему) этилацетат — метанол — вода, которая позволяет получить четкое разделение высших сахаров, рассматриваемый метод обеспечивает высокую точность результатов (табл.4).

Таблица 4. Состав кукурузной патоки

определенный методом бумажной и тонкослойной хроматографии

Сахариды, %

моно

ди

три

тетра

пента

гекса

гепта

окта

нона + высшие

Обычная патока (43 экв. глюкозы)

БХ

20,5

15,4

11,3

9,8

7,7

6,0

4,7

3,9

21,5

ТСХ

20,1

14,6

11,

8,6

7,2

5,4

4,9

3,4

23,9

Станд. отклонение для ТСХ

0,7

0,51

0,40

0,30

0,37

0,35

0,11

0,20

0,41

Патока с низким содержанием глюкозы и высоким содержанием мальтозы (43 экв. глюкозы)

БХ

6,8

34,4

17,2

9,4

2,3

2,6

2,4

4,0

20,0

ТСХ

7,3

35,1

17,5

8,5

2,5

2,4

2,0

2,8

21,6

Станд. отклонение для ТСХ

1,25

4,36

3,10

0,66

0,70

1,10

0,77

0,65

1,33

Патока с высоким содержанием глюкозы и мальтозы (70 экв. глюкозы)

БХ

41,1

41,4

3,2

4,8

3,8

1,8

2,4

-

1,6

ТСХ

40,8

42,1

3,5

3,1

2,7

1,5

2,4

-

3,1

Станд. отклонение для ТСХ

1,25

1,62

1,28

0,65

0,26

0,37

0,78

-

0,32

Страницы: 1 2

Смотрите также

Ртуть
Ртуть (лат. Hudrargyrum) – химический элемент 2 группы периодической системы Менделеева; атомный номер 80, атомная масса 200,59. Ртуть – элемент редкий и рассеянный, его содержание примерно ...

Экологические аспекты создания водородной энергетики (для учащихся средней школы)
Введение в проблему водородной энергетики для учащихся 9 классов на первом этапе возможно в виде как приведенных ниже выполненных самим учителем докладов, так и небольших сообщений, подготовленных с ...

Витамины В12 и В15
Витамины (от лат. Vita – жизнь) - группа органических соединений разнообразной химической природы, необходимых для питания человека, животных и других организмов в ничтожных количествах по с ...